副溶血性弧菌( Vibrio Parahemolyticus)是一种 革兰氏阴性杆菌 ,呈弧状、杆状或丝状等多种形状,没有 芽孢 。它是一种 海洋细菌 ,主要存在于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产品中。副溶血弧菌对酸敏感,在普通 醋的运用 中5分钟即可被杀死,对热的抵抗力较弱。 进食含有副溶血弧菌的食物可能导致 副溶血性弧菌食物中毒 ,也称为嗜盐菌食物中毒。临床上,副溶血弧菌引起急性起病、腹痛、呕吐、 腹泻 和 水样便 等症状。这种细菌是一种嗜盐性的革兰氏阴性菌,主要栖息在海水中。 副溶血弧菌的发现与1950年在 日本大阪 发生的一起集体食物中毒事件有关。这次事件是由于食用了被肠炎弧菌污染的 青鱼 干,导致272人中毒,其中20人死亡。此后,副溶血弧菌成为引起 食物中毒 的主要 病原菌 之一,在 台湾省 、 日本 和东南亚地区每年都有相当多的食物中毒病例发生。 副溶血弧菌是一种曲线状、杆状的 农杆菌 ,存在于海水和 河口 中。当人们摄入该细菌时,可能会引起胃肠道疾病。副溶血弧菌是氧化酶阳性、 兼性厌氧菌 ,不形成孢子。与 弧菌属 的其他成员一样,该菌具有运动性,有一个单极鞭毛。 总之,副溶血弧菌是一种在海洋中常见的病原菌,摄入后可能引起人类胃肠道疾病。它对酸敏感,在普通 醋的运用 中5分钟即可被杀死。副溶血弧菌的发现与1950年 大阪 的 副溶血性弧菌食物中毒 事件有关,此后成为引起食物中毒的主要 病原菌 之一。
简介
副溶血性弧菌( Vibrio Parahemolyticus,VP)是一种嗜盐性细菌。 副溶血性弧菌食物中毒 ,是进食含有该菌的食物所致,主要来自海产品,如 墨鱼目 、 海鱼 、 海虾 、海蟹、海蜇,以及含盐分较高的腌制食品,如 腌咸菜 、 腌肉 等。本菌存活能力强,在抹布和砧板上能生存1个月以上,海水中可存活47天。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、 腹泻 及 水样便 为主要症状。本病多在夏秋季发生于沿海地区,常造成集体发病。由于海鲜空运,内地城市病例也渐增多。
此菌对酸敏感,在普通 醋的运用 中5分钟即可杀死;对热的抵抗力也较弱。 副溶血性弧菌食物中毒 多发生在6~10月,海产品大量上市时。中毒食品主要是海产品,其次为咸菜、熟肉类、禽肉、禽蛋类,约有半数中毒者为食用了腌制品后。中毒原因主要是烹调时未烧熟煮透或熟制品被污染
发现过程
1950年,以日本 大阪府 为中心的 泉州市 地方,发生了 第二次世界大战 以来最严重的集体 食物中毒 事件。患者出现剧烈腹痛及 腹泻 的症状,原因不明。最后统计共有272名患者中毒,其中有20名死亡。发病的患者全部都食用了大阪府的行商所贩卖的青鱼干,因此当局立刻对这批鱼干进行分析。然而,在鱼干中并未发现任何已知会导致 食物中毒 的细菌。因此,当局怀疑有人刻意将毒物混入鱼干中,将这个事件作为 刑事案件 调查。
由于前一年的1949年才刚发生了并称为“日本国铁三大谜案”的 松川事件 、下山事件及 三鹰事件 ,在这样的背景下,导致了民众的恐慌。有人认为,这起集体 食物中毒 事件是为了使社会混乱而进行的下毒。然而,在鱼干中并未化验出包括砒霜、 亚硝酸盐 等任何有毒 物质 ,事件的原因仍然不明。
对此, 大阪大学 的藤原恒三郎教授从未知感染菌的角度进行了分析。他使用 琼脂 培养基 培养菌种,并进行动物实验,最后终于从鱼干样品中分离了一种新种细菌,即肠炎弧菌,找出了 食物中毒 的原因。由于这种新种细菌是 日本 人发现的,在当时的日本医学界掀起了一阵波澜。当时大多数的日本学者对病菌的概念,都还停留在19世纪的老旧观念;肠炎弧菌的发现震撼了他们。发现者藤原教授用“粗大且笔直,不断的活动”( 日语 :ふとっちょで真っ直ぐで、よく動き回る)来形容这种细菌的外型。此种病菌与当时 弧菌属 的代表 霍乱弧菌 外型差异甚大,因此藤原认为此菌应归类为 巴斯德氏菌属 ,在1951年将其命名为 Pasteurella parahaemolyticus并发表。
1955年,日本国立横滨医院的医师滝川 在腌渍物中发现了 食物中毒 的 病原菌 ,后来证明与大阪中毒事件的病原菌是相同的。同时,他也发现了这种细菌是嗜盐性的,因此,将此菌的 日语 名称定为病原性好盐菌(日文:病原性好 菌)。
1960年,日本东京及 千叶县 一带发生了多起因食用 日本竹筴鱼 而导致食物中毒的事件,检验后发现病原菌是肠炎弧菌,引起了医学界的注意。对此,厚生省(今厚生劳动省,日本中央政府的卫生主管单位)将肠炎弧菌列为引起 食物中毒 的重要 病原菌 之一,进行相关研究。
1963年,日本国立预防卫生研究所(今日本国立传染病研究所)的福见秀雄和坂崎利一证明了此种细菌应属于 弧菌属 ,将 学名 改定为Vibrio parahaemolyticus,同时也将此种细菌的 日语 名称改为肠炎弧菌(日文:腸炎ビブリオ),沿用至今。
性状
肠炎弧菌和 霍乱弧菌 、 创伤弧菌 等细菌,都是弧菌科弧菌属的成员。但是,肠炎 弧菌 和其他弧菌在一些特征上,有着相当的不同。肠炎弧菌的长度约是0.3×2µm,其细菌本体不像典型弧菌的弯曲状,反而是笔直的棒状(类似杆菌)。此外,肠炎弧菌不能使 乳糖 及 蔗糖 发酵,与可以发酵 葡萄糖 及蔗糖的其他弧菌科细菌不同,这也是区别肠炎弧菌与其他弧菌的方法之一。由于这个特性,肠炎 弧菌 在tcbs培养基上呈现亮绿色,与一般弧菌的黄色不同。
肠炎弧菌对酸碱改变敏感,适合生长的pH值约在7.5-8之间,可耐受的酸碱值为pH5-11。肠炎弧菌与 霍乱弧菌 相同,都喜欢偏碱性的环境,但是与霍乱弧菌不同的是,肠炎弧菌必须要在环境有 氯化钠 存在的条件下才能增殖(但是如果使用血液 琼脂 培养基 时则不需要添加氯化钠)。适合肠炎弧菌生长的盐度约在2-3%,超过10%或低于0.5%均不能增殖。
适合肠炎弧菌生长的温度约在20℃以上,温度在15℃以下时,生长会受到抑制。肠炎弧菌对热的耐受力相当低,使用一般的高温灭菌法即可完成杀菌。因此,因肠炎弧菌而造成 食物中毒 的患者,通常是肇因于食用未经煮熟的海产。此外,肠炎弧菌菌株在低温时也容易死亡。肠炎弧菌不耐干燥(aw=0.948时无法生长),在干燥环境中会迅速死亡。
肠炎弧菌的增殖速度很快,在含3% 氯化钠 的脑心浸出物培养液中,只要8分钟左右就会分裂一次。而该菌在海产中的繁殖也相当迅速,例如:30℃时,肠炎弧菌在 章鱼 中从102CFU/g繁殖到107CFU/g仅需六小时。肠炎弧菌的增殖迅速是造成食物中毒的一大原因。
肠炎弧菌拥有一大一小的两个 染色体 (分别有3.2×106和1.9×106个 核苷酸碱基对 ),是人类首次发现拥有 复数 染色体的细菌品种。
生物学特性
副溶血 弧菌 系弧菌科 弧菌属 ,革兰染色阴性, 兼性厌氧菌 ,为多副溶血弧菌形态杆菌或稍弯曲弧菌。本菌嗜盐畏酸。最适宜的 培养基 :温度为30℃—37℃,含盐2.5%—3%(若盐浓度低于0.5%则不生长),pH值为8.0—8.5。本菌对酸较敏感,当pH6以下即不能生长,在普通 醋的运用 中l一3min即死亡。在固体培养基上 菌落 常隆起,圆形,表面光滑,湿润。在3%一3.5%含盐水中繁殖迅速,每8~9min为一周期。对高温抵抗力小,50℃ 20 min;65℃ 5 min 或80℃ 1 min 即可被杀死。本菌对常用 化学消毒剂 抵抗力很弱,可被低浓度的酚和 煤酚 皂溶液杀灭。
临床表现
潜伏期自1小时至4天不等,多数为10小时左右。起病急骤,常有腹痛、 腹泻 、呕吐、失水、 畏寒 及发热。腹痛多呈陈发性 绞痛 ,常位于上腹部、脐周或回盲部。腹泻每日3~20余次不等,大便 性状 多样,多数为黄水样或黄糊便。约2%~16%呈典型的血水或洗肉 水样便 ,部分病人的粪便可为脓血样副溶血性弧菌或粘液血样,但很少有 里急后重 。
由副溶血性弧菌引起的 副溶血性弧菌食物中毒 一般表现为急发病,潜伏期2~24h,一般为10h发病。主要的症状为腹痛,优势腹痛在脐部附近剧烈。腹痛是本病的特点,多为阵发性绞痛,并有 腹泻 、恶心、呕吐、 畏寒 发热,大便似水样。便中混有黏液或脓血,部分病人有里急后重,重症患者因脱水,使皮肤干燥及血压下降造成休克。少数病人可出现意识不清、 肌肉痉挛 、面色苍白或发 等现象,若抢救不及时,呈虚脱状态,可导致死亡。
由于吐泻,患者常有失水现象,重度失水者可伴声哑和肌痉挛,个别病人血压下降、面色苍白或发 绀 以至意识不清。发热一般不如 细菌性痢疾 严重,但失水则较菌痢多见。国内报道的副溶血弧菌 副溶血性弧菌食物中毒 ,临床表现不一,可呈典型、胃 肠炎 型、菌痢型、 中毒性休克综合征 型或少见的慢性肠炎型型。本病 病程 自1~6日不等,可自限,一般恢复较快。
预防措施与其他细菌所致者似。
1、动物性食品应煮熟煮透再吃。
2、隔餐的剩菜食前应充分加热。
3、防止生熟食物操作时交叉污染。
4、 舟山梭子蟹 、 蟛蜞 、海蜇等水产品宜用饱和盐不浸渍保藏(并可加醋调味杀菌),食前用冷开水反复冲洗。
来源和传播
分布极广,主要分布在海水和水产品中,我国 华东地区 沿岸的海水的副溶血性弧菌检出率为47.5%~66.5%,海产鱼虾的平均带菌率为45.6%~48.7%,夏季可高达90%以上。除了海产品以外,畜禽肉、 腌咸菜 、 咸鸭蛋 、 家鱼 等都发现有副溶血性弧菌的存在。
海水是本菌的污染源,海产品、 海盐 、带菌者等都有可能成为传播本菌的途径,另外有肠道病史的居民、渔民带菌率偏高,也是传染源之一。
预防措施包括:动物性食品应煮熟煮透再吃;隔餐的剩菜食前应充分加热;防止生熟食物操作时交叉污染;海产品宜用饱和盐水浸渍保藏(并可加醋调味杀菌),食前用冷开水反复冲洗。
发病机理
吞服10万个以上活菌即可发病,个别可呈败血症表现。该菌有侵袭作用,其产生的TDH和TRH的 反应原性 和免疫性相似,皆有 溶血性贫血 活性和 肠毒素 作用,可引致肠袢 肿胀 、充血和肠液 留,引起 腹泻 。 TDH对心脏有特异性心脏毒,可引起心房纤维性颤动、期前收缩或心肌损害。有人发现 酶病腹泻有关。患者体质、免疫力不同,临床表现轻重不一,呈多型性。山区、内陆居民去沿海地区而感染者病情较重,临床表现典型;沿海地区发病者病情一般较轻。
流行病学
1、传染源传染源为病人,集体发病时往往仅少数病情严重者住院,副溶血性弧菌而多数未住院者可能成为传染源,但由于病人仅在疾病初期排菌较多,其后排菌迅速减少,故不至因病人散布病菌而造成广泛流行。
2、传播途径本病经食物传播,主要的食物是海产品或盐腌渍品,常见者为蟹类、 墨鱼目 、海蜇、鱼、 泥螺 等,其次为蛋品、肉类或蔬菜。进食肉类或蔬菜而致病者,多因食物容器或砧板污染所引起。
3、地区分布特点: 日本 及我国沿海地区为副溶血性孤菌食物中毒发病率的高发区。据调查,我国沿海水域、海产品中副溶血性弧菌检出率较高,尤其是气温较高的夏秋季节。但近年来随着海产食品的市场流通,内地也有 副溶血性弧菌食物中毒 的散在发生。
4、季节性特点及易感性:7~9月常是副溶血性弧菌食物中毒的高发季节。男女老幼均可患病,但以青壮年为多,病后免疫力不强,可重复感染。
5、食物的种类:主要是海产品,其中以 墨鱼目 、 短带鱼 、虾、蟹最为多见,如墨鱼的带菌率达93%,其次为盐渍食品。食品中副溶血性弧菌的来源:人群带菌者对各种食品的直接污染。沿海地区饮食从业人员、健康人群及渔民副溶血性弧菌带菌率为11.7%左右,有肠道病史者带菌率可达31.6~88.8%。间接污染,沿海地区炊具的副溶血性弧菌带菌率为61.9%,被副溶血性弧菌污染的食物,在较高温度下存放,食用前加热不彻底或者生吃,或熟制品受到带菌者、带菌的生食品、带菌容器及工具等的污染
PCR检测
用于检测该菌的PCR方法主要有任意 引物 PCR(abritrarilyprimedPCR,Ap-PCR)、针对任意引物PCR、多重PCR(muhiplex-PCR)、实时PCR(Real- time PCR)。 1、任意引物PCRMatsumoto等采用任意引物PCR对副溶血性弧菌进行检测。针对该菌的tdh基因和trh基因一段特异的序列,设计两条引物,
引物1:5’--GGTGCGGG AA-- 3’
引物2:5’一GTTTCGCTCC一3’
对1977~1998年所收集的227株副溶血性弧菌进行PCR。通过 电泳 分析发现,1996~1998年收集的22株 血清型 为03:K6菌株与1996年以前收集的03:K6血清型菌株基因序列有所不同,为03;K6血清型新出现的变异株,并最初出现在 孟加拉国 。这是目前最简单的以基因为基础的细菌亚分型方法。
2、针对任意 引物 PCR由于临床分离株绝大多数含有tdh基因,因此绝大部分研究者都根据tdh设计引物进行特异扩增。1993年,Lee等根据tdh基因设计引物,对36株TDH+株、89株TDH-株以及46株其他 弧菌 和肠道菌进行PCR检测。结果显示,36株TDH+株全部特异扩增出来,其余菌株都没有扩增;而检测灵敏度高,最低检测量可至40pg 脱氧核糖核酸 ,并可直接检测粪便标本,无需分离培养,方便快速。1999年,Kim等选择toxR基因序列设计两对 引物 ,5’--GTCTTCTGACGCAATCGTTG--3’和5’一ATACGAGTGGTTGCTGTCATG一3’,对14株副溶血性弧菌、14株其他弧菌进行PCR。结果显示,14株副溶血性弧菌都得到一条368bp的特异扩增亮带,而其他菌株没有特异扩增。此外,Venkateswaran等选择gyrB基因设计引物对副溶血性弧菌进行PCR、Cordova等选择pR72H基因设计引物进行PCR,特异性、灵敏度都很好。
3、多重PCR由于不是全部副溶血性弧菌都含tdh基因或trh基因,所以只针对tdh或trh的单一PCR,有时会漏检。多重PCR能全方位高效率地检测该菌。1994年研究人员等针对tdh、trh设计不同的 引物 对,在同一PCR反应体系内同时扩增tl、tdh、trh。结果显示,所有的副溶血性弧菌都扩增出tl基因,tl基因是该菌特异的;54%的副溶血性弧菌扩增出tdh基因;只有38.73%的副溶血性弧菌扩增出trh基因;该法灵敏度很高。与其他常规生化方法相比,多重PCR更快速,仅8h就能完成检测,结果更为准确、可靠,而且还可改进成定量竞争PCR,对标本中靶序列进行定量。
4、实时PCR常规PCR检测,需要从反应体系中吸取产物做 电泳 或Southern杂交等试验进行鉴定,转移过程中易污染,造成 假阳性 ,而且耗费时间。1996年,Tyagi开创了一种实时PCR( Real- 时间 PCR)。实时PCR是在PCR反应体系中加入标记有报告 基团 和 灭基团的线性Taqman 探针 或茎环型 荧光 分子信标探针,在基因扩增过程中,与产物杂交,此时,报告基团和淬灭基团分开,根据能量 共振 转移现象,报告基团发出荧光而被检测。这种方法操作简单,闭管检测,减少污染,灵敏度高,并且可以在PCR结束或PCR过程进行同步定性或定量检测,面且可以进行临床大规模快速检测。
治疗措施
1、支持及对症治疗 脱水者需输入 生理盐水 及 葡萄 盐水,或 口服补液盐 ,以纠正失水。血压下降者,除被动补充血容量,纠正酸中毒等外,可酌用血管活性药。
2、抗菌药物 轻度患者可不用抗菌药物,较重者可给复方新诺明或 庆大霉素 、 阿米卡星 和 诺氟沙星 等 诺 类抗菌药物【上述抗生素类可能使细菌产生耐药性,使用须谨慎】。
3、发生中毒后要立即停止食用可疑中毒食品,并到医院医治。副溶血性弧菌对 氯霉素 敏感。呕吐、 腹泻 严重者要补充水和盐。
中毒预防
加工海产品的案板上副溶血弧菌的检出率为87.9%。因此,对加工海产品的器具必须严格清洗、消毒。海产品一定要烧熟煮透,加工过程中生熟用具要分开。烹调和调制海产品拼盘时可加适量 醋的运用 。食品烧熟至食用的放置时间不要超过4个小时。主要病理变化为空肠及回肠有轻度糜烂,胃粘膜炎、内脏(肝、脾、肺)淤血等。
辅助检查
1、 免疫细胞 计数 总数多在1万mm3以上,中性粒细胞偏高。
2、便检查镜检可见白细胞或脓细胞,常伴有红细胞,易被误诊为 细菌性痢疾 。粪便培养可检出副溶血弧菌,绝大多数迅速转阴,仅少数持续阳性2~4天。
案例
2020年7月15日,广东卫健委通报了 广州市 6月的1起 副溶血性弧菌食物中毒 事件,发病48例,无死亡。